海马各区含有大量的乙酞胆碱酷酶(AChE)阳性终末，主要来源于基底前脑的胆碱能神经元。AD患者的中枢神经系统有广泛的神经病理学改变，其中以基底前脑胆碱能神经元损害占主要地位[m。学习记忆、认知行为的改善程度与海马胆碱能纤维网的密度密切相关Czl。近来研究表明人参皂贰( GS)处1可明显改善淀粉样肤所致小鼠被动回避，能够改变AChE活性[al，并且认为其对胆碱能系统的影响可能是人参皂贰Rgl的重要作用机制之一。本研究拟探讨人参皂贰对老龄大鼠海马结构胆碱能纤维改变的影响，为人参皂贰抗脑衰老及改善老年动物胆碱能系统认知能力提供可靠的酶细胞化学基础。

1材料和方法

1. 1实脸动物及分组选用相同环境下饲养的SPF级(中国医科大学动物部SCXK[辽〕2003-0009) Wistar雌性大鼠24只，随机分为3组(n=8)，青年组(3-r5月龄)、老龄组(27月龄)，老龄给药组(从第17个月始饲以人参皂贰至27个月龄)。给药方法:按照25 mg·掩一’·d-’的剂量[47将人参皂贰溶人水中，动物随日常饮水而自行服用(人参皂贰购自吉林省集安万泰中药厂，纯度为81写，主要成分为;Re: 21. 2 0 o .Rgl:10.000、Rbl:2.700、Rg2 : 3. 7 0 o、Rg3 : 2. 4 0 o、Rd:10.9%)。

1. 2 AChE酶细胞化学标本制备动物在10%水合抓醛(( 3. 5 ml/吨)腹腔麻醉下，经左心室主动脉插管灌注0. 9 % NaCI 150 ml, 4%多聚甲醛350 ml固定后取脑，4h后人30 0 o Holt溶液内，翌日待脑组织块下沉后，OC'I'包埋，-22℃恒冷箱切片机将脑组织切成额状20 }m厚连续切片。

1. 3 AChE酶细胞化学染色程序按照陈啸梅[s7并经我们改进后的方法进行AChE酶细胞化学染色。切片浸人双蒸水后，置人作用液(碱化乙酞硫胆碱5 mg.0. 06 mol/L醋酸钠6. 32 m1,0. 1 mol/L醋酸0. 2 m1,0. 1 mol/L柠檬酸钠0. 48 ml, 30 rnmol/L硫酸铜1 m1,4 rnmol/L异-OMPA 0. 2 ml, 5 ml铁氛化钾1 ml,蒸馏水0. 8 ml, pHS. 5-r 5. 6) 37℃恒温箱中孵育2h。然后脱水、透明、中性树胶封片。镜下观察可见棕黄色的AChE阳性纤维及终扣。

1. 4显微图像分析及统计学处理用MetaMorph/DP10/BX 41图像分析系统对AChE染色切片进行分析和处理。各组每例随机取4张切片，高倍镜下测定各组的CAl } CA3区、齿状回胆碱能纤维的密度(IOD=积分光密度值)。采用EXCEL 2000统计软件对所有数据进行统计学分析和处理，组间比较进行t检验和AVONA分析。

2结果

海马结构的CA3区、CAl区、齿状回、下托和海马伞内均含有丰富的AChE阳性纤维。本实验重点观察与学习记忆及老化密切相关的CA3 , CAl区和齿状回。镜下可见青年组海马CA3 , CAl区锥体细胞层棕黄色的胆碱能纤维非常密集，粗细均匀且交织成网。海马腔隙分子层内纵行纤维较长并形成串珠状，末端可见终扣(图1A, 2A)。齿状回的纤维在颗粒细胞层靠近分子层和多型细胞层处较为密集，着色亦很深(图 3A)。老龄组CA3区胆碱能纤维缺失明显，特别是锥体细胞层最为严重，纤维萎缩变细、断裂，串珠状纤维及终扣减少，但辐射层纵行纤维不明显且纤维横向分支少，稀疏纤维随处可见。并且纤维颜色亦变淡(图1B)。老年组CA1区锥体细胞层纤维变细，排列紊乱，颜色变淡且纤维网密度也降低，辐射层纵行纤维不明显且纤维横向分支少，末端终扣较少。有些纤维虽有串珠状特征，但很短(图2B)o

32人拳皂贰对老路大筑海马结构胆械能扦雄的影响

人参皂贰明显改善饥体的某些衰老症状，其适应原样作用，突进蛋白质代谢和改变霉活性的作用倍受关注人参皂贰通过促进乙院胆碱释放.增加坤经未梢摄取Rb1,rb2对神经元具有保护及营养作用，并可促进神经元突起再生，增强神经元抗损伤与凋亡的能力Cal。本研究给药组海马结构胆碱能纤维的各种改变有所减轻，CA3,CA1及齿状回3个亚区胆碱能纤维的密度均值比老龄组分别增加了31.2%,76.500和116. 8 0 o。本实验证实了人参皂贰不仅使损伤的海马结构胆碱能神经纤维开始侧枝出芽或者再生的轴突开始延伸，而且可使二者重新获得胆碱能纤维的支配。新近研究报道Csl丹参酮连续灌胃14d，观察到AI〕大鼠海马各亚区胆碱能纤维面积百分比显著低于对照组。我们在老龄前期给予人参皂贰低剂量10个月，在整个神经系统机能恢复过程中逐渐、持续的发挥其调节作用。娄爱林[}o」证明人参皂贰可促进海马CAl , CA3区苔鲜纤维末端的发芽，并可使齿状回颗粒细胞长时程增强的持续时间延长，从而提高大鼠的学习记忆能力，但尚缺少量化指标。本实验证明了学习记忆行为的改善程度可能与海马胆碱能纤维网的密度密切相关。人参皂贰提高老龄大鼠胆碱能纤维密度的能力，可能也与胆碱能系统相关介质酶活性等的恢复密切相关。