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疗效研究

益智康脑丸中当归对大鼠脑缺血损伤保护作用的实验研究

日期:2012-12-27 16:16

湖北医科大学附属第二医院(武汉430071)

德国柏林洪堡大学莎丽特医学院神经科

廖维靖 杨万同  周云峰

摘要探讨当归对大鼠脑缺血损伤是否具有保护作用。阻断大鼠右颈总动脉和大脑中动脉90

min后恢复再灌,给予25%当归注射液7. 5 mL静脉滴注6h。术后第8天用图像处理技术测定脑梗死体积。结果显示当归治疗组梗死体积显著小于实验对照组。本实验首次证实当归具有缩小脑梗死体积的作用,其作用机制待深人研究阐明。

关键词脑缺血 当归 脑梗死

 研究脑缺血损伤保护剂是国内外一直关注的课题,有效且无副作用的神经保护剂是中西医共同追求的目标。中医活血化癖药对脑缺血的保护作用引起西医的兴趣,活血化痕治则引起西方国家的重视。MEDLINE检索迄今未见当归能否作为脑缺血损伤保护剂的系统实验研究报道。为探讨当归对脑缺血的保护作用,作者在德国洪堡大学莎丽特医学院进行脑缺血损伤保护机制的合作研究时,在德方实验室动物缺血模型的基础上试用当归治疗,同期观察MK-801的作用,旨在探讨当归对脑缺血损伤是否具有保护作用,并为今后从活血化窟药中筛选脑保护剂及确定单一有效成分奠定基础。

1材料和方法

1. 1动物造模:雄性Wistar大鼠32只,体重250-v300 g。所有动物均进行右颈总动脉(Carotid common artery,CCA)和大脑中动脉(Middle cerebral artery , MCA )短暂阻断的手术,随机分为2组。一组不进行任何治疗用作实验对照组(13);另一组采用当归治疗(19)。动物在Halothane持续麻醉下置于加热垫上,将体温探头插人直肠测体温。切开鼠尾,将塑料导管插人尾动脉后固定,测量术中血压。切开颈部皮肤,暴露左颈静脉,插人导管并固定。在背部皮肤穿一小孔将导管引出,放置备用。仔细分离肌肉暴露CCA用橡胶细管结扎。切开头颅右MCA体表投影区皮肤,分离肌肉。用颅钻钻孔后,小心刺破硬脑膜并剥离。用弧型丝钩提起MCA,并用固定力量牵拉造成MCA短暂阻断,持续90min。小心将MCA放回原处恢复再灌,缝合皮肤。松开结扎CCA的橡胶管,缝合皮肤。术中测体温、血压、血糖、血氧、血二氧化碳分压、血酸碱度等生理参数,体温维持在(370.5)`C

1. 2给药:25%当归注射液,湖北医科大学附属第二医院药厂生产,批号分别为940614,970214970924。将7. 5 mL当归注射液加人固定压力注射泵,调定速度,6h滴注完毕。滴注中每2h测体温。剪去暴露体表的导管,牢固结扎后胶布固定。

1. 3取材:术后第一天评定肢体功能,测体温、血糖、血细胞压积,其后每天测体温,第8ti U C:冰相储放侍处埋。一G U L'但伶相甲冠朴连续切片,片厚40 um。将每20片中的第1.2张贴于一张玻璃片。每脑约做20张玻片。切片干燥过夜,酸性复红染色,梯度乙醇弱水,封片。采用德国Polaroid图像处理系统(Sprint Scan 35 Plus)测量每张切片的面私(mmZ)。观察有梗死的切片张数可计算出校死的长度,算出梗死的体积,单位为mm3 01. 4统计处理:实验数据用(x:)表示,辕人Excel 7. 0软件进行t检验。

2结果

实验对照组13只动物,1例因梗死灶出血体积显著大而被剔除,1例因梗死灶体积小于6 mm3剔除。这2例可能是手术误差所致。治疗组动物死亡5例,1例因梗死灶出血被剔除,1例也因体积小于6 mm“被剔除。统计分析时对照组实际例数是n只,治疗组12只。940614批号动物4只,970214批号7只,970924批号4只。术中、术后生理参数变化未见显著性差异,术后第1.8天肢体功能未见显著性差异。对照组、治疗组脑梗死体积变化见表1

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结果显示当归对脑缺血损伤具有保护作用。与MK-801缩小梗死的结果相比,当归优于MK-801 o MK-801的资料将由德方发表在英文期刊。

3讨论

测定梗死面/体积是观察梗死大小最直接客观的指标,体积指标较面积准确,用计算机进行图像处理更易做到精确量化。深人研究应观察功能、代谢指标以全面反映梗死变化。采用缺血/再灌模型较完全阻断血供的模型更能模拟人体发病的情况。术后第8天是梗死发展成最大的时间,且组织水肿消除,此时测定梗死体积最准确。

近年研究认为脑缺血损伤的病理生理机制是损伤级联反应,即兴奋性毒性、梗死周围去极化、炎症和程序性细胞死亡4个过程[m钙、谷氨酸、氧自由基、NO等涉及这些过程。中医认为缺血是察症,其治则为化痪,活血是化癖的前提。MEDLINE检索迄今未见当归作脑保护剂的研究。本文结果首次显示当归具有缩小脑梗死体积的作用。文献报道当归能够清除自由基川,本实验可能是当归清除自由基的作用结果。当归注射液的成分超过40种仁3J,当归成分之一的阿魏酸(ferulicacid)具有抗氧化损伤的作用C s7,本结果是否为阿魏酸的作用有待证实。

本实验预实验时,不同批号()的药液缩小梗塞的差异较大,可能与中药制剂质量不稳定有关,也可能是手术本身的原因。本实验所用剂量是通常文献报告剂量的一半,这是依动物实际体重、给药方式及便利而定,并非最适剂量。一次给药方法与传统的每天给药习惯不同,以便跟MK-801进行比较,结果提示当归潜在的保护作用相当大,同时说明药物疗效不一定是治疗时间越长越好,剂量越大越好。

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